川崎医学会誌 » Investigation of programmed cell death in the developing inner ear of mouse embryos *

マウス内耳発生におけるプログラム細胞死の検討

　プログラム細胞死の研究は以前から行われているが，その制御メカニズムは未だ不明な点が多い．これに対し我々はapoptosis 検出法であるTUNEL 染色で，胎生12日マウス内耳においてTUNEL 陽性死細胞にはapoptosis だけでなく，autophagic cell death も存在することを報告した．また我々は内耳毒性を有するCDDP を妊娠マウスに投与し，胎仔内耳の総死細胞数は不変であるのに対して，死細胞におけるapoptosis 比率減少とautophagic cell death 比率増加を発見し，これらが胎生期内耳の防御機構と考えた．本研究ではこの機構解明を目的に，CDDP 投与胎生12日マウスの内耳を用いて，関連遺伝子のReal time-PCR 法，Western Blot 法，免疫染色法による検討を行った．　Real time-PCR では，CDDP 投与でautophagy 関連遺伝子beclin1と，apoptosis 関連遺伝子cspase3の発現が増加した．免疫染色ではapoptosis 細胞のみcleaved caspase3蛋白発現を認め，Western Blot ではCDDP 投与でbeclin1とcspase3 の蛋白発現が増加し，cleaved caspase3は逆に減少した．　このbeclin1遺伝子発現増加は，以前に我々が報告したCDDP でのautophagic cell death 比率増加に矛盾しないものであった．これに対し，apoptosis 関連遺伝子のcaspase3発現増加は，apoptosis 比率減少と矛盾するが，免疫染色，Western blot の結果からは蛋白レベルでの抑制が示唆される．特にcaspase3蛋白増加に対し，切断後の活性型蛋白であるcleaved caspase3が逆に減少していることから，caspase3切断による活性化プロセスでの抑制が示唆された．（平成21年10月８日受理）

著者名: 柴田大
巻: 36
号: 1
頁: 35-45
DOI: 10.11482/2010/36.035.2010.Igakukaishi_Shibata.pdf